心臟組織單細胞解離酶MJ001專為人、小鼠、大鼠等動物心臟組織單細胞懸液制備設計，通過多元復合酶的溫和酶解作用將心臟組織高效解離成為單個細胞懸液，在高得率的同時能夠獲得高活性的單細胞，后續(xù)適用于單細胞測序、流式細胞分析、流式細胞分選、原代細胞培養(yǎng)、類器官3D培養(yǎng)等實驗。

使用方法

1、溶解酶干粉

初次啟用試劑盒時執(zhí)行該操作步驟。將A瓶中的酶干粉用力甩至瓶底；然后用移液槍取B瓶中的溶解液反復吹打A瓶中的酶干粉并轉(zhuǎn)移至B瓶中，必要時可將槍頭口用剪刀剪大，確保A瓶中酶干粉全部轉(zhuǎn)移至B瓶中；隨后蓋緊B瓶瓶蓋上下顛倒B瓶直至酶干粉完·全溶解，必要時可放置搖床上搖晃至完·全溶解，完·全溶解的酶溶液呈現(xiàn)清澈微棕色。

2、過濾分裝解離酶

在A瓶中酶干粉完·全溶解在B瓶溶解液后，根據(jù)后續(xù)實驗如需要無菌解離組織，則需用注射器和0.22μm無菌過濾器過濾除菌后分裝。建議每5mL分裝一瓶，分裝至A瓶中，分裝后應立即凍存在-20℃或-80℃冰箱中，可保存6個月。單次未使用完可凍存后下次繼續(xù)使用，但反復凍融不要超過三次，每凍融一次酶活會降低一部分，酶活降低時可增加酶的使用量以增強酶解效果。

3、酶解實驗操作

(1)實驗準備：預制碎冰，冰上解凍單細胞解離酶和酶解終止液，單細胞解離儀器開機預熱，PBS預冷，眼科剪、鑷子等無菌手術器械，40 μm無菌細胞篩，離心管、離心機等預冷。

(2)組織收集：無菌條件下收集組織，立即置于冷的PBS中，盡可能4h內(nèi)處理，如需放置更長時間，請使用高活性組織保存液（貨號MJ104）。

(3)清洗組織：將組織用冷PBS洗1-2次以去除血液、壞死組織等雜質(zhì)，稱重記錄。

(4)剪碎組織：將清洗過的組織轉(zhuǎn)移至解離管中，用鋒利眼科剪碎成1-2 mm3小塊，剪至泥糊狀，剪得越碎酶解就越充分，單細胞酶解時間就會越短；如有配備組織單細胞解離儀，覺得剪碎較麻煩也可不用嚴格剪碎，同樣能獲得較好的解離效果。

(5)酶解組織：組織剪碎后，取適量單細胞解離酶加入解離管中，上下顛倒解離管使解離酶與組織充分混勻。

①如配備有組織單細胞解離儀，可按照儀器操作規(guī)范進行單細胞解離。本產(chǎn)品適用市面上所有進口或國產(chǎn)品牌的組織單細胞解離儀，但需注意本產(chǎn)品解離效率比自備酶或其他競品的酶都高，解離時間可減少至少一半，需每隔5-10min確認一下解離情況，不同組織解離完·全的時間從5min到50min不等，在保證解離效果情況下盡可能減少酶解時間，酶解完·全即可終止酶解；

②如未配備組織單細胞解離儀，也可進行手動解離。在剪碎組織步驟中需嚴格按照要求剪碎組織；根據(jù)組織和所加酶體積選擇在1.5mL EP管或5mL EP管中，將解離酶與組織充分混勻，用剪刀將1mL移液槍槍頭口稍微剪大后，用移液槍用力吹打混合物，如吹打堵塞槍頭說明組織剪碎不夠徹·底，可繼續(xù)剪碎組織或?qū)岊^再剪大一些，保證能用移液槍反復吹打混合物，反復吹打十余次后立即放入37℃培養(yǎng)箱、水浴或金屬浴中孵育，有搖床效果更佳，每孵育5分鐘需進行一次反復吹打，直至組織團塊完·全解離成單細胞懸液。

(6)單細胞過濾：待組織完·全解離后，立即瞬離解離管3s，并將解離管插在冰上，用移液槍吸取上清通過40 μm的濾網(wǎng)進行過濾，過濾全程在冰上操作。

(7)終止酶解：取等量的酶解終止液（貨號MJ102）或完·全培養(yǎng)基進行終止酶解。

(8)收集細胞：4℃、400g離心5分鐘后棄上清，用預冷的PBS清洗后再離心棄上清。

(9)紅細胞裂解：取適量紅細胞裂解液（貨號MJ103）重懸細胞沉淀，冰上孵育10分鐘，間歇吹打輕搖，4℃、300g離心5分鐘后棄上清。

(10)清洗：取預冷的PBS重懸，4℃、300g離心5分鐘后棄上清，重復清洗2次。

(11)去除碎片：如碎片較多，可用高效碎片去除劑（貨號MJ101）去除碎片。

(12)細胞活性檢測：臺盼藍或AOPI染色，活細胞率應＞85%。

(13)細胞凍存：如單細胞解離后暫時無法進行后續(xù)實驗，可使用高效高活細胞凍存液（貨號MJ105）將單細胞重懸后直接凍存于-80℃，可凍存數(shù)年。

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